国家孕前优生实验室规范规范(7)

2019-01-26 13:40

(3)阴道毛滴虫检查:与清洁度检查同时进行。阴道毛滴虫呈梨形,比白细胞大2倍,顶端有鞭毛4根,在25-42°C温度下可活动。因此,在寒冷天,标本要采取保温措施。滴虫活动的最适PH为5.5-6.0。

(4)阴道真菌检查:同阴道毛滴虫检查。在湿片高倍镜下见到卵圆形孢子或假菌丝,常为芽生或成链状、分枝状。找到阴道真菌是真菌性阴道炎的诊断依据。 2. 沙眼衣原体抗体检测 【样本采集】

女性子宫颈棉拭标本的采集

用一支棉拭或棉球去除外宫颈(子宫颈阴道部)处多余的粘液,然后丢弃。

另用一支棉拭深入子宫颈内膜,滚动10-30秒。将棉拭放回转移试管,并在标签上注明病人身份和日期。带标本的棉拭可在常温下送检,不应使用转移媒体。如标本不在1天内接受检测,应将其冷藏(2-8℃ ),不要冷冻,这样最多可保持5天。 【操作步骤】

按试剂盒说明书进行。

以免疫层析法为例,说明如下。 (1)准备试剂,平衡至室温 (2)准备水浴箱至80DC

(3)提取衣原体抗原:取0.6毫升试剂并加入试管。

(4)涡旋混合至少30秒。将重新悬浮的颗粒移至一支提取试管中,将试管放入水浴锅(80℃ ±2℃)加热10-12分钟后,取出提取试管,室温下冷却5分钟。

(5)检测:从箔片袋内取出一个检测块将其水平放置。将滴管附件盖提取试管上,然后,向检测块的标本窗滴上5滴提取液。15分钟后读取结果。 (6)结果判定:

阳性:控制窗内有一条线出现,同时在结果窗内有一条线出现,即表示检测 结果为阳性。

阴性:控制窗内有一条线出现,但结果窗内无线条出现,即表示检测结果为 阴性。

无效结果:控制窗内有一条线出现,即表示检测过程中操作正确无误,所有 未能在15分钟后在控制窗显示一条线的检测块,其检测结果均属无效. 【质量控制】

(1)衣原体的生物活性不稳定,实验室检验的标本需要低温储存,并且应缩 短采集与检测之间的时间差。

(2)如标本不在1天内接受检测,应将其冷藏(2-8℃) ,不要冷冻,这样最多可保持5天。

(3)对于脓性排泄物样本,在采集时应对患处进行清洗后再采取标本。 3. 淋球菌检测 【样本采集】

生殖道分泌物,无菌留取。 【直接涂片镜检】 (1)玻片的制备

①取新载玻片在有磨砂的一面写上编号(化验单尾号或标本号〉。 ②在生物安全柜内涂片、干燥后进行革兰氏染色并镜检。 (2)染色

①涂片经火焰固定后,加结晶紫染液染1min,清水缓慢冲去染液。

②吸水纸吸干玻片后加碘液媒染1min,水洗。

③加脱色液,不时摇动20-30s,至无紫色脱落为止,水洗。 ④加复染液,复染30s,水洗。 ⑤干后镜检。

(3)镜检与结果报告

①阳性:革兰氏染色显微镜下为革兰氏阴性双球菌,呈双肾形成对排列。 ②结果报告:细胞内可见革兰氏阴性双球菌 (4)参考范围:阴性 【注意事项】

(1)新配制的染液应先用已知的革兰氏阳性菌和阴性菌(通常用金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌的16h培养物)进行对照试验,以检查染色液的质量。

(2)结晶紫与草酸铵溶液混合不能保存太久,如有沉淀则应重新配制。

(3)取样时需用拭子插入子宫颈3cm深取样送检,要避免受阴道分泌物污染拭子。 (4)对于不能及时送检的样本应常温保存,不可以冷藏。 【生物安全防护】

(1)操作前应做好自身防护(穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套)。 (2)在生物安全柜中进行涂片操作。

(3)所有不再需要的样本、培养物和其他生物性材料,应置于专用和有生物危害标记、用于处置危险废弃物的防漏容器内。

(4)试验操作工作面应以500ppm “84”消毒液擦拭,再用紫外线灭菌灯照射2小时。 (5)所有弃置的实验室生物样本、培养物和被污染的废弃物,应通过高压消毒或其他无害化处理。

四、 血型血清学检测

1.ABO血型鉴定(玻片法)

(1)方法:取清洁玻片1张,用蜡笔画成方格,表明抗A、抗B,分别加入抗A,抗B分型血清各1滴于相应的方格内,再各加受检者全血一滴于相应的方格内,不断轻轻转动使血细胞与抗A、抗B分型血清充分混匀。

另取洁净玻片一张,用蜡笔画成方格,表明A细胞、B细胞和O细胞。用滴管各加受检者血清1滴,再分别用滴管滴加A型、B型和O型试剂红细胞悬液1滴,轻轻转动充分混匀;

(2) 结果判定:肉眼观察有无凝集(或溶血)反应。 见下表。

A型、B型、O型正反定型结果分析 标准血清+受检者红细胞 受检者血 型 抗A 抗B 抗A+B A细胞 B细胞 O细胞 + - - + - + - + + + - + A B O AB - + + - + - + - - - - - 2. RH(D)血型(盐水法)

(1)方法:标记五支试管,分别加5种单克隆RH(D)抗血清(IgM)各1滴,在加入5%受检者红细胞盐水悬液各1滴,混匀,1000r/min离心1min观察结果。

(2)结果判定:如受检管凝集,即表示受检者红细胞上有RH(D)相应抗原,则为RH(D)阳性;受检者不凝集,即表示受检者红细胞上没有RH(D)相应抗原,则为RH(D)阴性。 五、血清葡萄糖检测(生化分析仪) 【样本采集】

血糖测定一般采用血清。 【试剂】

具有食品药品监督管理部门批准文号的试剂盒 【操作】

参照试剂盒说明书和生化分析仪的操作进行。

以XD811半自动生化分析仪检测为例,说明如下:

1.标本编号,取出试剂置室温放置30分钟,打开仪器预热10分钟; 2.按仪器操作提示,将仪器进入“功能选择”状态;

3.配制葡萄糖工作液(按所需用量配制,R1和R2以1:1配制,混匀); 4.按“仪器操作卡”提示进入葡萄糖测试状态; 5.按下表操作

蒸馏水 校准液 样本 工作液 空白管 10ul 校准管 10ul 样本管 1000ul 1000ul 10ul 1000ul 6.充分混匀,37°C水浴15分钟后,以空白管调零点,分别读取结果; 7.测定完毕,选定“清洗”用蒸馏水清洗3次; 8.按仪器操作,打印报告。

9.校准:准备校准液,进行校准测定,每3-6个月校准一次,更换不同批号的试剂或质控超标时,随时校准。

10. 室内质控品至少2个浓度水平。 【生物参考区间】 3.90-6.20 mmol/L 【注意事项】

1.操作中严格按操作规程进行校准和质量控制。

2.采血后应及时送检,立即离心,分离出血浆。否则标本置室温中,全血中葡萄糖将被分解代谢,大约每小时降低5%。

3.如果采血后不能迅速分离出血清或血浆,必须使用含氟化物的抗凝管, 以抑制血细胞(主要是白细胞〉对葡萄糖的酵解,保证测定准确。

4.建议使用带分离胶的真空采血管,并及时分离血清,可防止血细胞对葡萄糖的酵解。 六、乙肝五项检查(酶联免疫法) 1.名称乙肝五项,即:乙肝表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb或抗-HBs)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(HBeAb或抗HBe)、乙肝核心抗体(HBcAb或抗HBc)。 2.测定原理

HBsAg、HBsAb均采用双抗体(原)夹心法原理。用抗HBsAg多克隆抗体包被硝酸纤维素膜,配以红色乳胶标记的抗HBsAg单克隆抗体HBsAb,应用双抗体夹心法原理,定性检测血清/血浆中HBsAg;用HBsAg重组抗原和链霉亲和素-BSA包被硝酸纤维素膜,配以红

色乳胶标记的HBsAg重组抗原和生物素-BSA及其他试剂,应用双抗体夹心法原理,定性检测血清/血浆标本中HBsAb。

HBsAg、HBsAb测试时,将血清/血浆标本滴入试剂板加样处,标本在毛细效应下向上层析,如标本中含有相应的待测物质,在测试区(T)内会出现一条红色条带,则是阳性结果。如标本中不含有相应的待测物质,则测试区(T)将没有红色条带,则是阴性结果。无论待测物质是否存在于标本中,一条红色条带都会出现在质控区内(C)。质控区内(C)所显现的红色条带是判定是否有足够标本,层析过程是否正常的标准,同时也作为试剂的内控标准。 3.操作步骤

具体方法参照试剂盒说明书,举例如下。

在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书,使用前将试剂板和血清/血浆标本恢复至室温(20-30C)。从原包装铝销袋中取出试剂盒(注意:在打开铝箔前应先恢复至室温),在1小时内应尽快地使用。

(1)将试剂盒置于干净平坦的台面上,用吸管吸取血清/血浆标本,逐滴垂直加入于试剂板的两个加样孔中(每孔2-3滴)。

(2)加样后立刻开始计时,等待红色条带的出现,在15分钟时读取测试结果。在20分钟后读取的结果无效。 4.结果判定

阳性(+):两条红色条带出现。一条于测试区(T)内,另一条位于质控区 (C)。阳性结果表明:标本中含有待测物质。

阴性(-) :质控区(C)出现一条红色条带,在测试区(T)内无红色条带出现。阴性结果表明:标本中检测不出待测物质。

无效:质控区(C)未出现红色条带,表明不正确的操作过程或试剂盒己经变质损坏。在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在,应立即停止使用此批号产品,并与当地供应商联系。

注意:在进行HBsAg、HBsAb测试时,测试区(T)内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。只要在规定的观察时间内,不论该条带颜色深浅,即使只有非常弱的色带也应该判为阳性结果。

5.注意事项

(1)请控制判读时间,测试结果应在测定开始后20-30分钟内读取, 30分钟后读判定无效。 (2)本品对15个人的血清标本和分别含有5中不同抗凝剂(EDTA、柠檬酸钠、肝素钠、草酸钾和ACD Solution A的血浆标本检测,结果一致。

(3)乳胶法乙肝两项检测试剂板(血清/血浆)只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的存在,不能确定血样中病毒的含量。

(4)由于在技术上和操作上可能出现的失误,同时也由于标本中存在的干扰物质,试剂结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。 6.生物安全防护

(1)在检测前,所有标本均应视为\阳性\标本即生物危险品。 (2)如操作中不慎洒落血液,要及时对污染台面消毒处理。

(3)操作前一定要做好自身防护(穿白大衣、带口罩、自帽、胶皮手套)。 (4)HBV对低温、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性。煮沸100°C 10min、 高压蒸汽灭菌121°C 15min或干热160°C 2小时均可灭活HBV。5-10g/L次氯酸钠 30min, 1: 4000福尔马林37°C 72小时, 0.5%过氧乙酸15min均可破坏其传染性。 7.临床意义

(1) HBsAg阳性:血清HBsAg阳性,表示受检者处于HBV的感染状态。HBsAg 也可从许多乙肝患者体液和分泌物中测出,如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等。

(2)HBsAb阳性:多见于乙型肝炎处于恢复期,或既往曾感染过HBV,现在己恢复,而且对HBV有一定的免疫力;同时,HBsAb阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果,即接种免疫成功的指标。 七、肝功检查

丙氨酸氨基转移酶(ALT) 【样本采集】

ALT测定可以采用血清、肝素或EDTA抗凝血浆。 【试剂】

具有食品药品监督管理部门批准文号的试剂盒 【操作】

参照试剂盒说明书和生化分析仪的操作进行。

以XD811半自动生化分析仪检测为例,说明如下:

1.标本编号,取出试剂置室温放置30分钟,打开仪器预热10分钟; 2.按仪器操作提示,将仪器进入“功能选择”状态;

3.配制丙氨酸氨基转移酶工作液(按所需用量配制,R1和R2以4:1配制,混匀); 4.按“仪器操作卡”提示进入丙氨酸氨基转移酶测试状态; 5.加工作液1.0ml,标本50ul,及时混匀,立即测试; 6.读取结果;

7.测定完毕,选定“清洗”用蒸馏水清洗3次; 8.按仪器操作,打印报告;

9.校准:准备校准液,进行校准测定,每3-6个月校准一次,更换不同批号的试剂或质控超标时,随时校准。

10. 室内质控品至少2个浓度水平。 【生物参考区间】 <45 U/L

【注意事项】

1.操作中严格按操作规程进行校准和质量控制。

2.血清中含有游离α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH,使结果偏高;血清中谷氨酸脱氢酶增高时,在有氨存在的条件下,也消耗NADH,使结果偏高。 3.血清不宜反复冷冻保存,以免影响酶的活性。

4.血清标本出现溶血、脂血、黄疸或抗坏血酸的干扰情况参见抗干扰能力。 5.建议使用带分离胶的真空采血管,并及时分离血清 6.稳定性:在室温(20°C)可以保存48小时,在4°C冰箱可保存一周, 在-25°C以下可保存一个月。

八、肾功能检查(血清肌酐(Cr)检测) 【样本采集】

肌酐测定可以采用血清、肝素抗凝血浆。 【试剂】

具有食品药品监督管理部门批准文号的试剂盒 【操作】

参照试剂盒说明书和生化分析仪的操作进行。

以XD811半自动生化分析仪检测为例,说明如下:


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