国家孕前优生实验室规范规范(8)

2019-01-26 13:40

1.标本编号,取出试剂置室温放置30分钟,打开仪器预热10分钟; 2.按仪器操作提示,将仪器进入“功能选择”状态;

3.配制肌酐工作液(按所需用量配制,R1和R2以1:1配制,混匀); 4.按“仪器操作卡”提示进入肌酐测试状态; 5.按下表操作

校准液 样本 工作液 校准管 100ul 1000ul 样本管 100ul 1000ul 6.充分混匀,以蒸馏水调零点,分别读取结果; 7.测定完毕,选定“清洗”用蒸馏水清洗3次; 8.按仪器操作,打印报告。

9.校准:准备校准液,进行校准测定,每3-6个月校准一次,更换不同批号的试剂或质控超标时,随时校准。

10.室内质控品至少2个浓度水平。 【生物参考区间】 53- 115μmol/L 【注意事项】

1.操作中严格按操作规程进行校准和质量控制。

2.速率法仍受到α-酮酸的正干扰和胆红素的负干扰,高胆红素对测定结果有很大影响,使结果偏低,尤其新生儿高胆红素血症时,血肌酐测定结果甚至出现负值。 3.测定温度对呈色反应速度影响较大。

4.苦味酸有毒,NaOH为强碱,防止入口,不慎接触皮肤,迅速用水冲洗。 5. 稳定性:在4°C冰箱可保存3天,在-25°C以下可保存较长时间。 九、甲状腺功能检查(化学发光法) 【样本采集】

可以采用血清、肝素或枸橼酸盐抗凝血浆。 【试剂】

具有食品药品监督管理部门批准文号的试剂盒 【操作】

参照试剂盒说明书和自动分析仪的操作进行。 【生物参考区间】

甲状腺机能正常0.44-3.45

甲状腺功能减退>3.4 甲状腺机能亢进<0.39 【注意事项】 1.室温保持在18°C - 25°C的温度环境。

2.为了确保结果的有效性,每次试验必须做一个标准曲线。 3.不同批号的试剂不能混用。

4.需按照加入标准品和样品时的顺序来添加试剂。

5.建议对底物溶液和终止液的加入时间,是在熟练此方法的情况下进行的 (即,如果底物溶液彼此之间每隔3秒钟加入到反应孔中,那么终止液也应该按照相同的顺序和相同的频率来进行加样)

6.对于加入到一块板上的定标液、质控品和样品的总时间不应该超过15分钟。

7.冲洗程序:对于冲洗程序,建议使用洗板机。在进行了冲洗之后,倒转板在吸收纸上轻叩以除去孔中的残留物。要求冲洗三次。

8.干扰因素:尽量避免使用下列类型的血清和血浆样品,因为这些血清和血浆样品可能会导致错误的结果。发生溶血的样品、脂血样品、黄症样品、加入的EDTA抗凝剂的浓度高于5g/L的样品。

9. 血清和血浆样品可以在2-8°C的条件下储藏24小时。若要长期储藏,请分装样品冷冻在-20°C下,可以储藏90天。避免反复冻融。 十、梅毒血清学筛查(血清颗粒凝集试验,TPPA) 【样本采集】 可以采用血清 【试剂】

具有食品药品监督管理部门批准文号的试剂盒 【操作与结果判定】

参照试剂盒说明书。凝集法(TPPA) 举例如下: 1.具体操作

(1)用加样器将血清稀释液加入微量反应板第1孔中(100ul),从第2孔至第4孔各加25ul。

(2)用微量移液管取样品25ul至第1孔中,然后用微量加样器以2 n的方式从第1孔稀释至第4孔。

(3)用微量加样器在第3孔中加入25ul未致敏粒子,在第4孔中加入25ul 致敏粒子。 (4)用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟,加盖后于室温下水平静置。2小时后,观察其反应现象。

(5)每一次检测都要加阳性血清做对照,方法与样品测定相同 2.结果判定

(1)反应图象的判定

观察粒子的反应图象。将反应图象与介质对照的图象进行比较,并参照下表进行判断。 (2)判定基准

阳性:未致敏粒子(最终稀释倍数1: 40)的反应图象判定为(-) ,致敏粒子(最终稀释倍数(1: 80)以上)的反应图象为(+)时,最终判定为阳性。

阴性:无论未致敏粒子呈现何种反应图象,只要致敏粒子(最终稀释倍数1:80)的反应图象显示为(-)时,最终判定即为阴性。

保留:未致敏粒子(最终稀释倍数1: 40)的反应图象判定为(-)且致敏粒子(最终稀释倍数1: 80)的反应图象判定为(±)时,最终判定为保留。 注:通过本试剂判定为抗体阳性或保留时,经过一段时间再进行检查并与其他的检查结果和临床症状结合起来加以综合判断。

反应图象 判定 粒子成钮扣状聚集,呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形 (一) 粒子形成小环状,呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形 (±) 粒子环明显变大,其外周边缘不均匀且杂乱地凝集在周围 (+) 产生均一的凝集,凝集粒子在底部整体上呈膜状延展 (++) 3.参考范围:正常人血清抗TP抗体阴性 4.质量控制

(1)样品中如果存在红细胞等其他有形成分,会给反应带来不便,所以应在离心除去之后再进行检查。血清样品即使钝化也不会影响检查结果。

(2)致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前均应该混合均匀后再使用。 (3)微量反应板中的内容物充分混合后再静置。

(4)反应静置过程中,一定要对微量反应板加盖并禁止振摇。 (5)试剂盒中的试剂配制后仅限当天使用。 (6)试剂盒贮存于2-8°C,切勿冰冻保存。不同批号的试剂不可混用。

(7)定性测定时,如抗TP抗体浓度过高,可能会因前带现象出现假阴性结果。 (8)服用了含有免疫球蛋白血液制剂的患者样品中,由于可能服用的制剂而呈阳性反应,所以请注意对其做出准确判定。 5.生物安全防护

(1)梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒仅用于体外诊断,并只用于检测血清或血浆样本中的抗梅毒螺旋体抗体。

(2)这项测试仅表示样本中抗梅毒螺旋体抗体的存在,而不能作为机体感染梅毒螺旋体的标准。

(3)为了确保结果的准确性,可对样本用ELISA或Western Blot作进一步的分析。 (4)本试剂的溶解液,血清稀释液和阳性对照血清中含有0.1%的叠氮钠防腐剂。在废弃时要用大量的水冲洗以避免生成具有爆炸性的金属叠氮。 十一、风疹病毒IgG抗体检测(酶联免疫吸附法) 【标本采集】 一般可以采用血清 【试剂】

具有食品药品监督管理部门批准文号的试剂盒 【操作与结果判定】

参照试剂盒说明书。酶标仪测定举例如下: 1. 操作步骤

(1)将己包被抗原的微孔反应板条放至框架上,分别将己用稀释液做1: 40 稀释的待测标本,阳性、阴性对照和校正液加入孔中,每孔50μ1,再加入50 μ1加速剂,水平快速震荡1min,置37°C, 20min。

(2)洗涤弃去反应孔内液体,拍干(将板条倒扣于滤纸上拍干,下同)。用洗涤液连续洗涤4次,拍干。

(3)每孔加酶标记抗体100μ1,37°C,30min。同上洗板。加底物每孔加OPD/TMB溶液100μ1, 37°C,10min。

(4)终止每孔加终止液50μ1,于酶标仪上读取吸光度值。 2.结果判定 阴性:S/CO≤0.90。此处CO是以cutoff校正液之平均A值×校正因子(在校正液标签上)。 可疑: S/CO为0.91-0.99,需要重新测试。 阳性: S/CO≥1. 00 3.参考区间

正常人血清风疹病毒抗体IgG为阴性。 4.质量控制

(1)试剂盒保存在2-8°C,在有效期内使用。微孔条密封、干燥保存。检测前试剂盒恢复到室温(18-25°C)。

(2)试剂盒勿于高温、阳光照射环境中使用。

(3)标本2-8°C可保存7天,-20°C冷冻保存可至6个月,避免反复冻融标本。 (4)不同厂家、不同批号试剂不可混用,不得使用过期试剂。 (5)溶血、脂血、细菌污染血清不宜使用。

(6)洗涤微孔板时应彻底,孔内残留液体应在吸水纸上拍干,否则会影响测试结果。 (7)检验人员应经过操作前培训,熟悉判读结果:所使用加样器,酶标仪设备应定期进行校正,以确保实验数据的稳定。 5. 临床意义

(1)风疹病毒可由感染者的分泌物经呼吸道传播给易感人群。抗风彦病毒IgM 抗体在发病2-5天即可测出, 6-25天检出率可达高峰,常用于风疹急性期或 新近感染的诊断。抗风疹病毒IgG抗体用于既往感染,一般在感染后2---3周血清中出现抗风疹病毒IgG抗体, 6个月达高峰,并且阳性结果可持续数年。孕妇在妊娠开始4个月内感染风疹病毒,易引起流产、死胎、早产、胎儿宫内发育迟缓、神经发育畸形。同时,病毒可通过胎盘感染胎儿,引起先天性风疹综合征 (CRS),导致胎儿器官缺陷或畸形,如新生儿先天性白内障、先天性心脏病、先天性耳聋等。风疹病毒IgG、IgM用于对早孕妇女产前筛查和监测十分必要。 (2)鉴于技术上的原因和生物学上的交叉反应,对阳性结果的意义应结合临床综合判断,孕妇不能仅以此抗体阳性作为终止妊娠的依据。 【注意事项】

1.风疹病毒:先检测IgG抗体,若IgG抗体为阴性,进一步检查IgM抗体。 2.检测时应严格按照试剂盒说明书进行操作。

3.鉴于技术上的原因和生物学上的交叉反应,对阳性结果的意义应结合临床综合判断。

十二、巨细胞病毒IgG抗体和IgM抗体(酶联免疫吸附法) 【标本采集】 一般可以采用血清 【试剂】

具有食品药品监督管理部门批准文号的试剂盒 【操作与结果判定】

参照试剂盒说明书。酶标仪测定举例如下: 1. 操作步骤

(1)取出已包被HCMV抗原的微孔反应条板。稀释待测血清(血清1μl 加稀释液200μ1) ,加至微孔中,每孔100μl。将强阳性、弱阳性、阴性对照各100μ1加至相应孔内。 (2)37°C温育30min;弃去孔内液,每孔加200-300μ1洗涤液,共洗5次。每次弃去孔内液体后均需在滤纸上拍干(下同)。

(3)每孔加酶标记抗体100μ1, 37°C, 30min。洗板同上。 (4)加酶底物/色原溶液(OPD/TMB) ,每孔100μ1,37°C,15min。

(5)加终止液( 2mo1 /L H2S04 ) ,每孔50μ1。于酶标仪上读取吸光度(A) 值。 2.结果判定

(1)阴性对照平均A值必须<0.2;弱阳性对照平均A值在0.20-0.65;弱阳性对照与阴性对照平均A值之比必须大于或等于2。符合以上3个条件,本次试验结果可信,否则必须重复检测。

(2)若待测血清孔呈色较弱阳性对照孔深,则判为阳性,反之为阴性。但若在弱阳性对照A值+10%范围内,应复测一次,如确实高于弱阳性对照则判为阳性。 3.参考区间

正常人血清抗巨细胞病毒抗体IgM、IgG为阴性。

4.质量控制

(1)不同试剂盒所用抗原可能存在差异,检测敏感性也有差别,应参照阳性、 阴性对照设定Cut-off (CO)值。

(2)试剂盒自冰箱取出后应恢复至室温(18-25°C)后再开封使用。 (3)不同厂家、不同批号试剂不可混用,不得使用过期试剂。 (4)溶血、脂血、细菌污染血清不宜使用。

(5)洗涤微孔板时应彻底,孔内残留液体应在吸水纸上拍干,否则会影响测试结果。 (6)检验人员应经过操作前培训,熟悉判读结果;所使用加样器,酶标仪设备应定期进行校正,以确保实验数据的稳定。 5. 临床意义

(1)巨细胞病毒(CMV)是人类病毒性感染的常见病原体之一。CMV感染可引起多种传染性疾病,特别是围产期孕妇感染是引起胎儿宫内发育迟缓、发育畸形的主要原因,可影响神经系统发育及导致智力障碍。 (2)血清中抗巨细胞病毒IgM抗体阳性有助于对急性或活动性巨细胞病毒感染的诊断, 脐带血查出抗巨细胞病毒IgM抗体说明胎儿宫内感染。

(3)抗巨细胞病毒IgG抗体阳性对诊断既往感染和流行病学调查有意义,若间隔3周后抽取血清该抗体阳性滴度升高4倍以上(双份血清进行对比),则对判断巨细胞病毒近期复发感染有意义。

(4)由于技术上的原因和生物学上的交叉反应,对阳性结果的意义应结合临床综合分析,尤其是孕妇,不应仅将抗巨细胞病毒-IgM抗体阳性作为终止妊娠的依据。 十三、弓形虫IgG抗体和IgM抗体检测(酶联免疫吸附法) 【标本采集】

一般可以采用血清。 【试剂】

具有食品药品监督管理部门批准文号的试剂盒 【操作与结果判定】

参照试剂盒说明书。酶标仪测定弓形虫IgG举例如下: 1. 操作步骤

(1)准备所需数量的板条,并恢复至室温。开封后,未用板条可在2-8°C,保存6周。 (2)制备洗涤液:使用前用DDW按1: 10稀释,洗涤液室温下可保存5天,2-8°C下,保存2周。

(3)制备样本稀释液:使用前用洗涤液按1: 50稀释成样本稀释液。样本稀释液2-8°C下,可保存2周。

(4)样本稀释:取待检血清10uL,加入1ml样本稀释液中,混匀。

(5)加样:每孔加入已稀释的样品血清100ul。按每孔100ul加入阴性对照血清,阳性对照血清和临界点对照血清,至少需要一个阳性对照,一个阴性对照和两个临界点对照血清。设一孔为空白(加入100ul样本稀释液)。 (6)用封板膜盖好反应板,置37°C温育45分钟。

(7)洗涤:每孔用洗涤液洗板,反复4次后拍干,每次停留30秒钟。 (8)每孔加入酶联物100ul,用封板膜盖好反应板,置37°C温育45分钟。 (9)洗涤:每孔用洗涤液洗板,反复4次后拍干,每次停留30秒钟。 (10)每孔加入底物100ul,置37°C温育15分钟。 (11)每孔加入100ul终止液,终止反应。 (12)在30分钟内于450nm波长读取OD值。


国家孕前优生实验室规范规范(8).doc 将本文的Word文档下载到电脑 下载失败或者文档不完整,请联系客服人员解决!

下一篇:北京市主体功能区划

相关阅读
本类排行
× 注册会员免费下载(下载后可以自由复制和排版)

马上注册会员

注:下载文档有可能“只有目录或者内容不全”等情况,请下载之前注意辨别,如果您已付费且无法下载或内容有问题,请联系我们协助你处理。
微信: QQ: