结果进行比较。如果二者有显著性差异，那么就可以证明我们得到的这一组抗原具有结肠癌特异性。
相关性分析：通过相关性分析，找出这些抗原中哪些抗原与临床指标（结肠癌亚型、分期、分化程度、预后等）有指示作用，以及是否适合结肠癌的早期诊断等。
课题承担单位：中国医学科学院肿瘤研究所
课题参加单位：中国科学院北京基因组研究所、中南大学 课题负责人：徐宁志
主要学术骨干：汪红英、陈主初、陈汉春、孙海丹 经费比例：30%
四、年度计划
研究内容 预期目标 1、建立小鼠正常巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞及相关的TAM、TAF、TAE的分离和体外培养技术； 2、确定分泌蛋白质的亲和富集方法； 3、确立正常巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞分别转化为TAM、TAF、TAE的诱导方法； 4、绘制小鼠正常巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞及相关的TAM、TAF、TAE的分泌蛋白质组图谱； 5、构建AOM及DSS诱导的结肠癌小鼠模型； 6、建立AOM及DSS诱导的结肠癌小鼠模型的病灶组织与癌旁组织的体外培养技术； 7、定量分析AOM及DSS诱导的结肠癌小鼠模型的病灶组织与癌旁组织的分泌蛋白质组； 8、收集200例结肠癌血清样本、150例非肿瘤的肠炎疾患患者血清、150例胃癌患者血清、100例健康人血清。 1、小鼠正常巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞及相关的TAM、TAF、TAE的分离和培养； 2、小鼠正常巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞及相关的TAM、TAF、TAE的分泌蛋白质组图谱的构建； 3、AOM及DSS诱导的结肠癌小鼠模型的构建； 第 4、AOM及DSS诱导的结肠癌小鼠模型的病灶组织与癌旁组织的分 泌蛋白质组定量分析； 5、临床血清样本的收集。 一 年
研究内容 预期目标 1、建立SILAC、iTRAQ、MRM等定量分析分泌蛋白质变化的方法； 2、比较小鼠正常巨噬细胞与TAM、成纤维细胞与TAF、上皮细胞与TAE分泌蛋白质组的差异； 3、比较人正常巨噬细胞系与TAM、成纤维细胞系与TAF、上皮细胞系与TAE分泌蛋白质组的差异； 4、整合人与小鼠分泌蛋白质差异数据，获得TAM、TAF、TAE分泌的功能蛋白质； 5、建立和优化结肠癌细胞与TAM、TAF、TAE的二元共培养体系； 6、构建APCmin转基因小鼠模型； 7、定量分析APCmin转基因小鼠模型的病灶组织与癌旁组织分泌蛋白质组； 8、收集200例结肠癌血清样本、150例肝癌患者血清、100例健康人血清； 9、在国际主流期刊上发表高水平研究论文6-9篇。 1、比较结肠癌与TAM、TAF或TAE共培养体系中分泌蛋白质组动态变化的； 2、鉴定诱导巨噬细胞向TAM、成纤维细胞向TAF转化的应答分子； 3、确定TAF、结肠癌细胞分泌蛋白质对上皮细胞功能的影响； 4、建立和优化TAM、TAF与结肠癌细胞的三元培养体系； 5、构建TAM、TAF与结肠癌细胞的三元培养体系的分泌蛋白质图谱； 6、MRM定量分析小鼠结肠癌模型的血清肿瘤相关蛋白质； 7、收集100例结肠癌血清样本、150例乳腺癌患者血清、100例健康人血清； 1、定量蛋白质组学方法进行小鼠正常巨噬细胞与TAM、成纤维细胞与TAF、上皮细胞与TAE分泌蛋白质组差异的比较； 2、定量蛋白质组学方法进行人正常巨噬细胞系与TAM、成纤维细胞系与TAF、上皮细胞系与TAE分泌蛋白质组差异的比较； 第 3、人与小鼠细胞分泌蛋白质差异的比较与数据整合； 4、结肠癌细胞与TAM、TAF、TAE的二元共培养体系的建立和优二 化； 5、APCmin转基因小鼠模型的构建； 6、APCmin转基因小鼠模型的病灶组织与癌旁组织分泌蛋白质组定年 量分析； 7、临床血清样本的收集。 1、定量蛋白质组学方法进行结肠癌与TAM、TAF或TAE共培养体系中分泌蛋白质组动态变化的比较； 成纤维细第 2、诱导巨噬细胞向TAM、胞向TAF转化的应答分子的筛选； 3、TAF细胞分泌蛋白质对上皮细胞功能的影响； 三 4、结肠癌细胞分泌蛋白质对上皮细胞功能的影响； 5、TAM、TAF与结肠癌细胞的三元培养体系的建立； 年 6、TAM、TAF与结肠癌细胞的三元培养体系的分泌蛋白质图谱的构建； 7、小鼠结肠癌模型的血清肿瘤相关
研究内容 蛋白质的MRM定量分析； 8、临床血清样本的收集。 预期目标 8、在国际主流期刊上发表高水平研究论文6-9篇。 1、结肠癌细胞与TAM、TAF共培养体系中各细胞组分的定量分泌蛋白质组分析； 2、结肠癌细胞、TAM、或TAF分泌蛋白质对巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞的功能影响； 3、结肠癌细胞分泌蛋白质对正常巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞第 转化为TAM、TAF、TAE的调控机制的研究； 4、小鼠细胞和结肠癌模型的分泌蛋白质组数据的综合生物信息分四 析，建立蛋白质组数据库； 5、临床血清标本中结肠癌相关蛋白质标志物的MRM定量测定。 年 1、定量分析结肠癌细胞与TAM、TAF共培养体系中各细胞组分的分泌蛋白质组； 2、确定结肠癌细胞、TAM、或TAF分泌蛋白质对巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞的功能影响； 3、发掘结肠癌细胞分泌蛋白质对正常巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞转化为TAM、TAF、TAE的调控机制； 4、建立2x5个差异蛋白质的数据集：巨噬细胞与TAM、成纤维细胞与TAF、结肠上皮细胞与结肠癌细胞、结肠上皮细胞与TAM、结肠上皮细胞与TAF； 5、确定与结肠癌发生发展相关的微环境分泌蛋白质群； 6、MRM定量测定临床血清标本中结肠癌相关蛋白质标志物； 7、在国际主流期刊上发表高水平研究论文6-9篇； 8、申报国家发明专利2-3项。
研究内容 预期目标 1、探索TAM、TAF分泌蛋白质对结肠癌细胞生物学行为的影响及其机理； 2、揭示二元/三元共培养系统的分泌蛋白质对于结肠上皮细胞EMT的影响； 3、阐明TAM、TAF分泌蛋白质对结肠癌细胞信号通路网络的调控； 4、进一步研究结肠癌细胞分泌蛋白质对正常巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞转化为TAM、TAF、TAE的调控机制； 5、构建定量血清标志物预测模型，验证其特异性，确定结肠癌特异的血清蛋白质标志物群； 6、定量血清标志物预测模型与临床指标（分期、分化程度、预后等）的相关性分析； 7、最终确定可能用于临床的结肠癌相关标记物和潜在药物靶标； 8、在国际主流期刊上发表高水平研究论文6-9篇；申报国家发明专利2-4项； 9、 数据汇总、整合，准备结题。 1、TAM、TAF分泌蛋白质对结肠癌细胞生物学行为的影响及其机理的研究； 2、二元/三元共培养系统的分泌蛋白质对于结肠上皮细胞EMT的影响； 3、TAM、TAF分泌蛋白质对结肠癌细胞信号通路网络的调控； 第 4、结肠癌细胞分泌蛋白质对正常巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞转化为TAM、TAF、TAE的调控 机制的深入研究； 五 5、定量血清标志物预测模型的构建、特异性验证和相关性分析。 年