(2)苯 重蒸馏。 (3)环己烷 重蒸馏。 (4)二氯甲烷 重蒸馏。 (5)无水乙醇 重蒸馏。
(6)乙酰化溶液 按150ml苯、50ml乙酸酐和0.1ml硫酸的比例混合配制。
(7)层析滤纸 新华牌中速层析滤纸。
(8)展开剂 无水乙醇十二氯乙烷，按(2＋1)比例(体积比)配制。 (9)乙酰化滤纸 将层析滤纸裁成长27cm、宽15cm。取20张卷成圆筒形，逐张浸入到盛有2000ml乙酰化溶液的烧杯中，滤纸圆筒状中空部分放入一个高10cm，内径6cm玻璃管(防止滤纸在搅拌时被搅破)。将电动搅拌棒置于玻璃柱中心，在(50～55)℃下缓慢搅拌6h，在搅拌浸泡过程中，溶液液面始终保持超出滤纸1cm，并在通风橱中进行。然后，静置浸泡过夜。取出滤纸在通风橱内晾干，再将滤纸逐张放入无水乙醇中浸泡4h以上，取出晾至微干，夹入粗滤纸之间，用玻璃板压平至干备用。经乙酰化处理过的滤纸，对着光线观察，质地应均匀，透明度一致。如质地不均匀，透明度明、暗不一，则不能用于分析。
乙酰化滤纸检验方法：在乙酰化滤纸上分别点3，4－苯并芘、芘、1，2－苯并芘溶液和三种物质的混合液，用乙醇和二氯甲烷(2＋1)为展开剂，展开上升20cm后，在荧光灯下观察，三种物质均分开，3，4
－苯并芘的斑点Rf值小于0.10，此滤纸即可供分析使用。 (10)标准溶液 贮备液的配制方法同一法，临用时，用苯稀释成1.00ml含2μg苯并〔α〕芘的标准溶液，贮于棕色容量瓶中，并置冰箱中保存。 (四)采样
采样方法同第十二章第一节中总悬浮颗粒物大流量采样－重量法。 (五)分析步骤 1.样品提取 同一法(415页)。 2.纸层析分离
将空气总悬浮颗粒物样品的提取液定容后，作为纸层析点样待测液。 (1)点样 在乙酰化滤纸一端距底边5cm处，用铅笔轻轻划一横线，在横线上点6个样：二个点样品、二个点标准(取10μl标准溶液含0.02μg苯并〔α〕芘)、二个点试剂空白(均为平行双样)。各点间隔2cm。用微量注射器吸量样品提取液，根据苯并〔α〕芘浓度点样10～50μl。在点样过程中用吹风机缓缓送风，促使溶剂挥发，点样斑点直径不应超过5mm，点样速度应缓慢。如需将全部样品点样时，可用玻璃毛细管点样。溶液点完后，可用少量苯洗涤浓缩瓶，并将洗涤液全部点在斑点上。按相同操作步骤点标准溶液和试剂空白溶液。 (2)层析 在层析缸中加入适量展开剂，将点完样的层析滤纸悬挂在层析缸中，下端浸入展开剂约5mm，将层析缸用透明胶纸密封并避光，
待溶剂前沿上升至离原点20cm处，取出滤纸，在通风橱中使展开剂自然晾干。然后在暗室内，于365nm紫外光下观察层析纸上苯并〔α〕芘的亮紫色荧光斑点，并用铅笔圈出苯并〔α〕芘标准斑点及与其位置相对应的样品斑点和空白斑点。
(3)洗脱 用光亮无锈的剪刀分别剪下层析滤纸上苯并〔α〕芘标准、样品和空白斑点，各放入5ml比色管中，各管准确加入5.00ml苯，加盖，于60～70℃水浴中，不断振摇，浸泡15min，使苯并〔α〕芘转移至苯液中。 3.测定
(1)洗脱液的荧光分光光度测定 将标准、样品和空白斑点的苯洗脱上清液分别倒入10mm石英比色皿中，在激发狭缝10nm，激发波长385nm和发射狭缝5nm，发射波长400，405和410nm的条件下，分别测定荧光强度(mm)。
(2)苯并〔α〕芘荧光斑点直接扫描定量用荧光分光光度计的薄层扫描仪时，将层析纸展开的一面朝下，用透明胶纸将其固定于玻璃板上，放入薄层层析扫描板框座架上，设定激发波长为385nm、入射狭缝10nm、入射狭缝5nm，发射波长为405nm，以标准斑点调节仪器的负高压和记录器灵敏度，使记录笔的响应值在1/2满量程处。然后在发射波长400、405和410nm处，对标准，空白和样品斑点逐一进行直线或曲线移动扫描，测得每个斑点峰高或峰面积的积分值之和，即为该斑点的荧光强度(mm或mm2)。
(六)计算
1.荧光光度法测定洗脱液或斑点直接扫描标准、空白和样品的相对荧光强度：
式中A——相对荧光强度；
A405——于405nm发射波长处测定的荧光强度； A400——于400nm发射波长处测定的荧光强度； A410——于410nm发射波长处测定的荧光强度。 2.空气中苯并〔α〕芘浓度
式中c——空气中苯并〔α〕芘浓度，μg/100m3； A——样品斑点相对荧光强度，mm2或mm； A0——试剂空白样品相对荧光强度，mm2或mm； As——标准样品相对荧光强度，mm2或mm； W——标准斑点苯并〔α〕芘含量，μg； B——样品洗脱定容体积，μl； D——点样时所取洗脱液体积，μl； S1——样品滤纸的总面积，cm2； S2——分析时所取样品滤纸的面积，cm2；
Es——由实验确定的苯并〔α〕芘的平均提取效率； V0——换算成标准状况下的采样体积，m3。
(七)说明
(1)纸层析法分离－荧光光度法测定苯并〔α〕芘，具有灵敏度高，操作简便，样品便于保存等优点，是目前测定苯并〔α〕芘普遍采用的方法之一，检出限为2ng/5ml。
(2)精密度和准确度对0.58μg苯并〔α〕芘重复测定的相对标准差小于6%；对5μg苯并〔α〕芘的加标回收率为95%～108%。 (3)精确量取10μl混合样品提取物各5份进行纸层析法和薄层层析法比较，测定结果见表6－13，从表中结果可以看出两种方法测定结果基本上是一致的。目视观测纸层分离荧光点分界不清晰，不如薄层法。但制备乙酰化滤纸比较容易。
表6－13 两种分离方法测定飘尘中3，4－苯并芘的比较
三、薄层层析－荧光或紫外分光光度法 (一)原理
采集在玻璃纤维滤纸上颗粒物中的3，4－苯并芘(Bap)，用充氮升华法或连续提取法提取，再经醋酸纤维素薄层层析法分离，分离出的Bap斑点，用苯洗脱，以荧光分光光度法或紫外分光光度法定量。 (二)仪器 (1)薄层涂布器。 (2)薄层层析仪。