(3)离心机 4000rpm。
(4)玻璃熔封铁芯转子 长6mm。 (5)电热式磁力搅拌器。 (6)其他仪器同二法(425页)。 (三)试剂
(1)玻璃纤维滤纸预处理同一法(415页)，Bap的空白值不应大于1ng。 (2)无水乙醇 重蒸馏。 (3)甲醇 重蒸馏。 (4)乙醚 重蒸馏。
(5)苯 使用前提纯，提纯方法：在分液漏斗中每次加少量浓硫酸，振摇，至浓硫酸层无色为止，再加水振摇数次，洗去硫酸。然后加入无水硫酸钠脱水，再蒸馏。
(6)展开剂 甲醇+乙醚+水＝4+4+1(体积比)。
(7)薄层板 以每块板(200×200mm)平均需用4g乙酸纤维素，和15ml无水乙醇的比例调成糊状，在涂布器上制板。涂布后，先在室温下风干，再于80℃干燥箱中活化30min。然后，放在干燥器内，冷却备用。 (8)乙酸纤维素 160～250目，结合酸的含量为26%～30%。乙酸纤维素制备方法：量取682.5ml乙酸酐、300ml苯、7.5ml水依次放入2L烧杯中，混匀。置于冰水浴中，缓慢加入10ml高氯酸，搅匀(注意防止反应剧烈溅出)。然后，在不断搅拌下慢慢加入100g微晶纤维素(色层用)，在通风橱内于30～35℃水浴中放置2h，并不断搅拌，以保证
乙酰化反应充分，并注意观察温度，以防温度骤增。然后，再倒入大型离心管中，以4000rpm速度，离心3～5min，除去上层乙酰化剂溶液，沉淀物用无水乙醇洗涤三次，再离心，至pH＝6为止。最后将乙酰化纤维素置于通风橱中吹风晾干。放置过夜，再放入干燥箱中，于80℃干燥1h，取出冷却后，研磨，过160目筛，备用。
(9)3，4－苯并芘标准溶液同一法(415页)，临用时配制成1.00ml含10μgBap标准溶液。 (四)采样
采样方法同一法(415页)。 (五)分析步骤 1.样品提取 2.薄层分离①
(1)点样取活化处理过的薄层板，将三边各刮去5mm。在距离底边2cm处，以1．5cm间隔，用毛细管将样品液全部(或一部分，视浓度而定)，在薄层板上作条状点样。斑点不大于15mm×3mm。用0.05ml苯洗管壁，洗液再点样。如此反复，直至洗液无荧光为止。同时，以同样方法，用微量注射器取10μl苯并芘标准溶液(0.1μg)点样，作为标准对照点。另外一个点不点样品，作为展开剂空白点。如用紫外分光光度法测定时，标准对照应点0.5μg苯并芘，并且不留展开剂空白点。 (2)层析点样后薄层板放入薄层层析仪中，加入15ml展开剂。待展开剂前沿上升至15cm处，取出薄层板，放在通风橱中，让展开剂自然
挥发，晾干。然后在暗室内，于紫外线灯下观察薄层板上荧光斑点。用针划出苯并芘标准斑点和其相对应位置的样品斑点和空白点。 (3)洗脱用光亮无锈的小刀仔细刮下标准斑点、样品斑点和空白点。通过漏斗分别移入10ml比色管中，再加入5ml苯，并放入一个玻璃熔封铁芯转子。将比色管放在盛水的烧杯中，于电热磁力搅拌器上加热65℃，10min，进行洗脱。然后，在离心机上，以4000rpm，离心2min。上清液分别转移于10ml比色管中。再向原比色管中加5ml苯，重复洗脱一次，合并洗脱液，混匀，作为被测样品。 3.测定
将标准管及样品管和空白管中洗脱液均用苯定容至10ml，分别进行荧光或紫外分光光度法测定，测定步骤同二法(425页)。 (六)计算 同二法(425页)。 (七)说明
(1)乙酸纤维素薄层法可将样品中的3，4－苯并芘与其他多环芳烃化合物完全分离，不受或少受其他干扰物的影响。由于它具有灵敏度高，重现性好，分离时间比纸层析法快等优点，所以这个方法仍被广泛采用。
(2)检出限本法检出限用荧光分光光度法为1ng/10ml紫外分光光度法为300ng/10ml。
(3)乙酸纤维素目前市场还没有商品供应，需要自己制备。乙酸纤维
素的结合酸含量对分离有一定的影响，结合酸最适范围26%～30%为最好。结合酸测定步骤如下： ①试剂
a.0.500mol/L氢氧化钠－乙醇水溶液(3＋1)。 b.0.500mol/L盐酸溶液：一级。 c.丙酮：一级。
d.0.500mol/L氢氧化钠溶液。 ②测定步骤
a.总酸测定：称取乙酰化纤维素0.500g放到回流器的磨口瓶中，加入丙酮15ml溶解乙酰化纤维素，在不停振摇下加入1ml水及15ml0.500mol/L氢氧化钠乙醇溶液，摇匀。在65℃水浴中回流30min，冷却后加入20.00ml 0.500mol/L盐酸，10min后，以酚酞为指示剂，用0.500mol/L氢氧化钠溶液滴定。 计算
式中V1——0.500mo1/L氢氧化钠－乙醇溶液体积，ml； V2——0.500mol/L盐酸体积，ml； V3——0.500mol/L氢氧化钠滴定体积，ml； 60——乙酸摩尔质量； W——样品质量，g。
b.游离酸的测定：不加温回流，其余步骤和计算与测定总酸相同。
c.结合酸的计算
结合酸(%)＝总酸－游离酸
例：总酸测定消耗氢氧化钠17.56ml
游离酸测定消耗氢氧化钠12.96ml
③此法比纸层析法分离多环芳烃效果好，荧光斑点不扩散，清晰。3，4－苯并芘与其他荧光斑点之间有明显的无荧光带分界线，如果展开两次或进行连续展开，分界效果更佳。
④薄层分离样品后最好当日将样品洗脱定量测定，如果不能完成时，应将薄层板放在暗箱内保存，24h内无有明显变化，放置5天后再经薄层扫描测定，3，4－苯并芘结果偏低6%～10%。
(4)鉴于苯并芘(Bap)的强致癌性，实验中的一切操作均在白搪瓷盘中进行，防止泼散污染，可随时用重铬酸钾－浓硫酸洗液处理，Bap可被强氧化剂破坏。 参考文献
1 中国预防医学科学院环境卫生监测所.环境空气质量监测检验方法.北京：中国科技出版社，1991：31～42
①苯并〔a〕芘为强致癌性物质，操作时务必注意安全。 ①应避光直射，以防Bap光解。