测量，除另有规定外，要求分离度大于1.5， 分离度R?2(tR2?tR1)
W1?W2式中：tR1－—相邻前一峰的保留时间；tR2－—相邻后一峰的保留时间； W1、W2－相邻两峰的宽度。 5、 注意事项：
a用峰高法要检查测量峰的拖尾因子 拖尾因子S?Wh/0?05
2d1式中：Wh/0.05－0.05距离底边5％峰高处的峰宽度； d1－—峰极大至前沿之间的距离（即峰高上距底边5％处至峰上升边的半边峰宽）。（除另有规定外，S应在0.95～1.05之间。）
b 色谱柱：色谱柱因填料不同分为，硅胶色谱柱和离子交换柱。前者用于正相色谱；
化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱或离子对色谱。其中最常用的十八烷基硅烷键合硅胶。后者用于离子交换色谱，凝胶或玻璃微孔球等，用于排阻色谱。
C色谱柱的处理：整个流路进行清洗，洗涤剂为有机溶剂（如丙酮、苯、醇类）及
蒸馏水等，冲淋干净、烘干、备用。
d干法装柱载体应进行筛分，进行沉降，除去和较小粒子，使粘度均匀。 e湿法装柱宜用等比重匀浆法和非等比重匀浆法两种。
F内标物的选择：内标物应是样品中不含的组分，否则因峰重叠影响准确性；内标
物的保留时间应与待测成分相近，达到完全分离，分离度需大于1.5；内标物必需是纯的化合物，若非纯品无干扰峰也可采用。
G理论塔板数N的测定：色谱柱的效能以理论塔板数N计算，在选定条件下，注入
供试品溶液（根据各该品种项下规定的内标物溶液），记录色谱图，量出供试品主成分或内标物峰的保留时间（tR以分钟或长度计，均取相同单位）和半高峰宽（Wh/2）按N=5.54[tR/（Wh/2）]2计算色谱柱的理论塔板数，如果测得色谱柱理论塔板数低于各该品种项下规定的最小理论塔板数，应改变色谱柱条件（如柱长、载体性能等），使理论塔板数达到要求。 五、检测举例：
阿昔洛韦片含量测定：
（一）原文： 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿昔洛韦50 mg）置50ml量瓶中，加0。4％氢氧化钠溶液5ml超声1分钟，加水适量，于热水浴振摇10分钟，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液适量，加水稀释成每1ml中含20ug的溶液，照高效液相色谱法（附录VD）测定。
色谱条件与系统适用性试验： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－水（10︰90）为流动相；检测波长为254nm。取阿昔洛韦对照品溶液5ml，加入鸟嘌呤检查项下的鸟嘌呤对照品贮备液1ml，摇匀，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，阿昔洛韦峰与鸟嘌呤峰的分离度应符合要求。
测定法 取本品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加0。4％氢氧化钠溶液5ml使溶解，
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用水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀精密量取20ul注入液相色谱仪中，记录色谱图；另取阿昔洛韦对照品适量，精密称定，同法制成1ml中含20ug的溶液，作为阿昔洛韦对照品溶液，同法测定按外标法以峰面积计算，即得。 （二）根据原文设计检验方案： 操作步骤：
1、色谱条件与系统适用性试验： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－水（10︰90）为流动相；检测波长为254nm。精密称取阿昔洛韦 mg置50ml量瓶中，加0,4％氢氧化钠溶液5ml超声1分钟，加水适量于热水浴振摇10分钟，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，即可为阿昔洛韦对照品溶液。取阿昔洛韦对照品溶液5ml，加入鸟嘌呤对照品贮备液1ml（取鸟嘌呤对照品10mg置100ml量瓶中，加0,4％氢氧化钠溶液适量，使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为鸟嘌呤对照品贮备液），摇匀，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，阿昔洛韦峰与鸟嘌呤峰的分离度应符合要求，除另有规定外，要求分离度大于1.5， 分离度R?2(tR2?tR1)
W1?W2式中：tR1－—相邻前一峰的保留时间；tR2－—相邻后一峰的保留时间； W1、W2－相邻两峰的宽度。 2、供试品的测定：
①供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿昔洛韦50 mg）（称取量g =
50mg?平均片重﹡1000）置50ml量瓶中，加0。4％氢氧化钠
规格mg溶液5ml超声1分钟，加水适量，于热水浴振摇10分钟，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即可。
②对照品溶液的制备：精密称取阿昔洛韦对照品50mg置50ml量瓶中，加0,4％氢氧化钠溶液5ml超声1分钟，加水适量，于热水浴振摇10分钟，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即可。 ③测定：取上述供试品溶液20ul与对照品溶液20ul分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。 计算公式： 标示量％＝WR?稀释倍数AS平均片重g???100%
WS?稀释倍数AR规格g AS —— 供试品的峰面积（峰高） AR —— 对照品的峰面积（峰高）
WR ____ 对照品的取样量g
WS ____ 供试品的取样量g
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实验十二、维生素Ｃ注射液含量测定
一、实验目的：
二、实验原理： 维生素C分子中的烯二醇基具有还原性，能被I2 定量地氧化成二酮基
三、实验仪器与试液：移液管（10ml）量筒（10ml、）锥形瓶（250ml）滴定管（25ml） 稀醋酸、淀粉指示液、丙酮、碘滴定液(0.1mol/L) 四、实验步骤：
精密量取本品适量（约相当于维生素Ｃ0.2g），加水15ml与丙酮 2ml，摇匀，放置5 分钟，加稀醋酸4ml 与淀粉指示液1ml ，用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色并持续30秒钟不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6
。
计算公式：
TVFV?S?100% 标示量（%）C标示 式中：T— 为每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6 V?V0 - V空 为消耗碘滴定液的实际体积ml VS--为供试品溶液的体积ml。 C标示即规格（2ml:0.1g）
五、记录：
消耗滴定液体积 计算的含量 % 平均含量 %
项目 份数 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 43
六、计算相对平均偏差并结论：（规定为：含维生素Ｃ(C6H8O6)应为标示量的90.0％～110.0％。） 附：
滴定操作过程：
1、酸式滴定管（酸管）的准备
酸管是滴定分析中经常使用的一种滴定管。除了强碱溶液外，其他溶液作为滴定液时一般均采用酸管。
使用前，首先应检查活塞与活塞套是否配合紧密，如不密合将会出现漏水现象，则不宜使用。其次，应进行充分的清洗。根据沾污的程度，可采用下列方法： ① 用自来水冲洗；
② 用滴定管刷（特制的软毛刷）蘸合成洗涤剂刷洗，但铁丝部分不得碰到管壁（如用泡沫塑料刷代替毛刷更好）。
③ 用前法不能洗净时，可用铬酸洗液洗。为此，加入5～10mL洗液，边转动边将滴定管放平，并将滴定管口对者洗液瓶口，以防洗液撒出。洗净后，将一部分洗液从管口放回原瓶，最后打开活塞将剩余的洗液从出口管放回原瓶，必要时可加满洗液进行浸泡。
④ 可根据具体情况采用针对性洗液进行洗涤，如管内壁留残存的二氧化锰时，可应用草酸、亚铁盐溶液或过氧化氢加酸溶液进行洗涤。
用各种洗涤剂清洗后，都必须用自来水充分洗净，并将管外壁擦干，以便观察
内壁是否挂水珠。 2、操作溶液的装入
装入操作溶液前，应将试剂瓶中的溶液摇匀，使凝结在瓶内壁上的水珠混入溶液，这在天气比较热、室温变化较大时更为必要。混匀后将操作溶液直接倒入滴定管中，不得用其他容器（如烧杯、漏斗等）来转移。此时，左手前三指持滴定管上部无刻度处，并可稍微倾斜，右手拿住细口瓶往滴定管中倒溶液。小瓶可以手握瓶身（瓶签向手心），大瓶则仍放在桌上，手拿瓶颈使瓶慢慢倾斜，让溶液慢慢沿滴定管内壁流下。
用摇匀的操作溶液将滴定管洗三次（第一次10mL，大部分可由上口放出，第二、第三次各5mL，可以从出口放出，洗法同前）。应特别注意的是，一定要使操作溶液洗遍全部内壁，并使溶液接触管壁1～2分钟，以便与原来残留的溶液混合均匀。每次都要打开活塞冲洗出口管，并尽量放出残流液。对于碱管，仍应注意玻璃球下方的洗涤。最后，将操作溶液倒入，直到充满至零刻度以上为止。
注意检查滴定管的出口管是否充满溶液，酸管出口管及活塞透明，容易看出（有时活塞孔暗藏着的气泡，需要从出口管快速放出溶液时才能看见），碱管则需对光检查乳胶管内及出口管内是否有气泡或有未充满的地方。为使溶液充满出口管，在使用酸管时，右手拿滴定管上部无刻度处，并使滴定管倾斜约30°，左手迅速打开活塞使溶液冲出（下面用烧杯承接溶液，或到水池边使溶液放到水池中），这时出口管中应不再留有气泡。若气泡仍未能排出，可重复上述操作。如仍不能使溶液充满，可能是出口管未洗净，必须重洗。在使用碱管时，装满溶液后，右手拿滴定管上部无刻度处稍倾斜，左手拇指和食指拿住玻璃珠所在的位置并使乳胶管向上弯曲，出口管斜向上，然后在玻璃珠部位往一旁轻轻捏橡皮管，使溶液从出口管喷出（下面用烧杯接溶液，同酸管排气泡），再一边捏乳胶管一边将乳胶管放直，注意当乳胶管放直后，再松开拇指和食指，否则出口管仍会有气泡。最后，将滴定管的外壁擦干。
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3、滴定管的读数
读数时应遵循下列原则：
⑴装满或放出溶液后，必须等1～2分钟，使附着在内壁的溶液流下来，再进行读数。如果放出溶液的速度较慢（例如，滴定到最后阶段，每次只加半滴溶液时），等0.5～1分钟即可读数。每次读数前要检查一下管壁是否挂水珠，管尖是否有气泡。
⑵ 读数时，滴定管可以夹在滴定管架上，也可以用手拿滴定管上部无刻度处。不管用哪一种方法读数，均应使滴定管保持垂直。
⑶对于无色或浅色溶液，应读取弯月面下缘最低点，读数时，视线在弯月面下缘最低点处，且与液面成水平；溶液颜色太深时，可读液面两侧的最高点。此时，视线应与该点成水平。注意初读数与终读数采用同一标准。
⑷ 必须读到小数点后第二位，即要求估计到0.01mL。注意，估计读数时，应该考虑到刻度线本身的宽度。 4、滴定管的操作方法
进行滴定时，应将滴定管垂直地夹在滴定管架上。
如使用的是酸管，左手无名指和小手指向手心弯曲，轻轻地贴着出口管，用其余三指控制活塞的转动。但应注意不要向外拉活塞以免推出活塞造成漏水；也不要过分往里扣，以免造成活塞转动困难，不能操作自如。滴定操作可在锥形瓶和烧杯内进行，并以白瓷板作背景。
维生素Ｃ注射液
拼音名：Weishengsu C Zhusheye 英文名：Vitamin C Injection
书页号：2000年版二部－793 本品为维生素Ｃ的灭菌水溶液。含维生素Ｃ(C6H8O6)应为标示量的90.0％～110.0％。 本品中可加适量的焦亚硫酸钠为稳定剂。 【性状】 本品为无色或微黄色的澄明液体。 【鉴别】 取本品适量（约相当于维生素Ｃ0.2g），照维生素Ｃ项下的鉴别(1)、(2) 试验，显相同的反应。 【检查】 pH值 应为5.0 ～7.0 （附录Ⅵ H）。 颜色 取本品，加水稀释成每1ml 中含维生素Ｃ50mg的溶液，照分光光度法（附录 Ⅳ A），在420nm 的波长处测定，吸收度不得过0.06。
细菌内毒素 取本品，依法检查（附录Ⅺ E），每1ml中含内毒素量应小于2.5EU。 其他 应符合注射剂项下有关的各项规定（附录Ⅰ B）。 【含量测定】 精密量取本品适量（约相当于维生素Ｃ0.2g），加水15ml与丙酮 2 ml，摇匀，放置5 分钟，加稀醋酸4ml 与淀粉指示液1ml ，用碘滴定液(0.1mol/L)滴定， 至溶液显蓝色并持续30秒钟不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6 。
【类别】 同维生素Ｃ。
【规格】 (1) 2ml:0.1g (2) 2ml:0.25g (3) 5ml:0.5g (4) 20ml:2.5g 【贮藏】 遮光，密闭保存。
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