2、绘图
3、计算
附：仪器操作：
（一）、 准备
开启电源，按“电源”开关，钨灯亮；按“氢灯”开关，氢灯电源接通；再按“氢灯触发”按钮，氢灯亮，预热30分钟。
注：选择光源（氢灯的工作范围是200～360nm；钨灯工作范围是360～1000nm）。仪器后背部有钨灯开关，如不需要钨灯时可将它关闭。
选择测定波长。将空白溶液和样品溶液依次序放入样品架上，暗箱盖无需关闭。 （二）、测定 仪器零点的校正。 选择开关置于“T”。
灵敏度旋钮置“1”（放大倍率最小）。
调节“0％”（T）旋钮，使数字显示为“00.0” 空白溶液测定。 将空白溶液置于光路
盖上暗箱盖，调节“100％”“T”，使数字显示为100.0（此时不能再动“0％”的旋钮）。 注：如果显示不到100.0，可适当增加灵敏度的档数，同时应重复“1”的操作。 样品溶液的测定。
（1）透光率的测定 将样品溶液置于光路中，数字显示器上直接读出被测溶液透光率“T”值。 （2）吸收度的测定 重复1、2的操作 将选择开关置于“A”，旋动吸光度调整旋钮，使数字显示为“000.0”。将样品溶液移入光路，数字显示器上直接读出吸收度A值。
（3）浓度C的测量：选择开关由“A”旋到“C”，将已标定浓度的溶液移入光路，调节“浓度”旋钮使得数字显示为标定值。将被测溶液移入光路，即可读出相应的浓度值。 （三）、结束工作
取出样品架上溶液。关闭光源和电源。待冷却，罩上布罩。
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实验十一、 阿昔洛韦片含量测定（HPLC法）：
一、实验目的：
1、学会高效液相色谱仪的使用。
2、学会使用高效液相色谱仪测定阿昔洛韦片的含量并进行计算。 二、仪器药品 高效液相色谱仪 阿昔洛韦片 等等。 三、实验原理：
高效液相色谱法是将具有不同极性的单一溶剂或用不同比例配成的混合溶剂、缓冲溶液等作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入供试品，被流动相带入柱内，在填充剂上进行分离，各成分先后进入检测器，用记录仪（微处理机、显示器）记录色谱图。
高效液相色谱法适用于挥发性低，热稳定性差，分子量大的高分子化合物以及离子型化合物等的定性、定量分析。 四、仪器药品
高效液相色谱仪
1组成：主要由输液系统、进样系统、色谱柱、检测器、记录器、显示器及数据处理机（或组分收集系统）等组成。使用时按仪器的说明书进行操作。
五、实验步骤：
（一）原文： 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿昔洛韦50 mg）置50ml量瓶中，加0。4％氢氧化钠溶液5ml超声1分钟，加水适量，于热水浴振摇10分钟，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液适量，加水稀释成每1ml中含20ug的溶液，照高效液相色谱法（附录VD）测定。
色谱条件与系统适用性试验： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－水（10︰90）为流动相；检测波长为254nm。取阿昔洛韦对照品溶液5ml，加入鸟嘌呤检查项下的鸟嘌呤对照品贮备液1ml，摇匀，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，阿昔洛韦峰与鸟嘌呤峰
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的分离度应符合要求。
测定法 取本品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加0。4％氢氧化钠溶液5ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀精密量取20ul注入液相色谱仪中，记录色谱图；另取阿昔洛韦对照品适量，精密称定，同法制成1ml中含20ug的溶液，作为阿昔洛韦对照品溶液，同法测定按外标法以峰面积计算，即得。 （二）根据原文设计检验方案： 操作步骤：
1、色谱条件与系统适用性试验： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（反向色谱柱）；甲醇－水（10︰90）为流动相；检测波长为254nm。精密称取阿昔洛韦 mg置50ml量瓶中，加0,4％氢氧化钠溶液5ml超声1分钟，加水适量于热水浴振摇10分钟，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，即可为阿昔洛韦对照品溶液。取阿昔洛韦对照品溶液5ml，加入鸟嘌呤对照品贮备液1ml（取鸟嘌呤对照品10mg置100ml量瓶中，加0,4％氢氧化钠溶液适量，使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为鸟嘌呤对照品贮备液），摇匀，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，阿昔洛韦峰与鸟嘌呤峰的分离度应符合要求，除另有规定外，要求分离度大于1.5，
分离度R?2(tR2?tR1)
W1?W2式中：tR1－—相邻前一峰的保留时间；tR2－—相邻后一峰的保留时间； W1、W2－相邻两峰的宽度。 2、供试品的测定：
①供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿昔洛韦50 mg）（称取量g =
50mg?平均片重）置50ml量瓶中，加0。4％氢氧化钠溶液
规格mg5ml超声1分钟，加水适量，于热水浴振摇10分钟，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即可。
②对照品溶液的制备：精密称取阿昔洛韦对照品50mg置50ml量瓶中，加0,4％氢氧化钠溶液5ml超声1分钟，加水适量，于热水浴振摇10分钟，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即可。 ③测定：取上述供试品溶液20ul与对照品溶液20ul分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。 计算公式： 标示量％＝WR?稀释倍数AS平均片重g???100%
WS?稀释倍数AR规格g AS —— 供试品的峰面积（峰高） AR —— 对照品的峰面积（峰高）
WR ____ 对照品的取样量g
WS ____ 供试品的取样量g
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实验十一、高效液相色谱法的应用
一、实验目的：
1、学会高效液相色谱仪的使用。
2、学会使用高效液相色谱仪测定药品的含量并进行计算。 二、仪器药品 高效液相色谱仪 阿昔洛韦片 等等。 三、实验原理：
高效液相色谱法是将具有不同极性的单一溶剂或用不同比例配成的混合溶剂、缓冲溶液等作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入供试品，被流动相带入柱内，在填充剂上进行分离，各成分先后进入检测器，用记录仪（微处理机、显示器）记录色谱图。
高效液相色谱法适用于挥发性低，热稳定性差，分子量大的高分子化合物以及离子型化合物等的定性、定量分析。 四、仪器药品
高效液相色谱仪
1组成：主要由输液系统、进样系统、色谱柱、检测器、记录器、显示器及数据处理机（或组分收集系统）等组成。使用时按仪器的说明书进行操作。
2使用要求：①色谱柱的填料和流动相的组分，应按各该品种项下的规定，但色谱柱的型号、填料颗粒大小以及色谱柱的长度和内径，均可根据具体情况选择。②流动相应在其测定波长处以水为空白测定的吸收度应符合紫外分光光度法对溶剂的有关规定。③高效液相所用的供试品应先经滤过处理进样，注样量一般为数微升。 3测定方法：
（1） 测定条件的选择（系统适应性试验）
测定前，可先按各该品种项下规定的条件用供试品或对照品及内标物进行预试，以检验系统的适应性。必要时，可对除填充物品种以外的其他条件，如填充物的型号、颗粒大小、色谱柱的长度、流动相的配比和流速，进样量以及检测器的灵敏度等，作适当调整，使色谱柱的最小理论塔板数符合该品种项下的规定，有关峰的分离度和对称因子应符合要求，保留时间合适等，以达到准确测量。
（2）供试品的测定，由于不同结构的物质和不同波长处检测，其吸收度的差异较大，计算时须加校正因子。
① 内标法加校正因子测定供试品中主要成分或某个杂质的含量：
a按各该品种项下的规定，精密称（量）取内标物和杂质对照品，分别配成溶
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液，按校正因子测定的规定，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图，测量内标物和某个杂质对照品的峰面积和峰高，按公式计算校正因子：f?Ai/mi
Ar/mr式中f--校正因子；Ai—内标物峰面积和峰高；mi--内标物的质量；Ar--杂质对照品的峰面积和峰高；mr--杂质对照品的质量。
b取各该品种项下规定配制含有内标物的供试品溶液注入仪器，记录色谱图，测量供试品（或其杂质）峰和内标物的峰面积和峰高，计算含量。 含量ms?f?As f--校正因子； ms--供试品（或其杂质）的含
Ai/mi量；As--供试品（或其杂质）峰面积和峰高；Ai—内标物的峰面积和峰高；mi—内标物的质量。
c采用内标对比法（已知浓度样品对照法），即先配制已知浓度的标准样品，加入一定量内标物，再将内标物按相同量加入同体积溶液中，分别注入仪器。配制标准样品相当于测定相对校正因子，因此，对不知校正因子的样品，则可用此法。按公式计算含量。
As)供试品（Ci%）供试品 Ai ＝As（Ci%）标准品()标准品AiAs（）供试品 (Ci%)供试品＝Ai?(Ci%)标准品
As（）标准品Ai( 对于正常峰，可用峰高h代峰面积求含量
hs（）供试品 (Ci%)供试品＝hi?（Ci%）标准品
hs（）标准品hi② 外标法测定供试品中主要成分或某个杂质含量：
A按各该品种项下的规定，精密称（量）取杂质对照品，配制成溶液，分别精密量取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量峰面积（或峰高）；以对照溶液的浓度为纵坐标，峰面积（或峰高）为横坐标，绘制标准曲线谱。
B另按规定，精密称（量）取供试品，配制成溶液精密量取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量峰面积（或峰高），在标准曲线上读出供试品中所含代测成分的含量，计算，即得。
C采用外标法时，应重复试验，以求得好的精密度。
D如采用外标一点法，方法简便，但要求进样量准确及实验条件横定，同时配制对照溶液的浓度与供试品某组分的浓度应相近，同样体积进样2～3次，取峰面积平均值，以减少误差。 E计算：含量ms?mr?As Ar4、结果计算：定量分析时，要求有较好的定量峰与其他峰及内标峰的分离度，便于准确
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