实验五、萘谱生片的有关物质检查 （薄层色谱法）
一、 实验目的：
掌握铺板、点样、展开、观察结果等薄层色谱法的操作技能。掌握自身对照法检查有关物质的操作方法。 二、仪器药品：
萘普生片、无水乙醇、甲苯、四氢呋喃、冰醋酸、
紫外光灯(254nm)、微量毛细管或点样器、恒温干燥箱，薄层展开缸等。 三、 实验原理：
此法系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。
四、实验步骤：
（一）原文： 有关物质 取本品的细粉适量（约相当于萘普生0.4g），加无水乙醇，振摇，使萘普生溶解并稀释制成每1ml中含萘普生40mg的溶液，滤过，取滤液作为供试品溶液，照萘普生项下的方法，自“精密量取适量”起，依法检查，应符合规定。（精密量取适量，加甲醇稀释成每1ml 中含0.10mg的溶液，作为对照溶液；另取6-甲氧基-2- 萘乙酮对照品，加甲醇制成每1ml 中含50μg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述三种溶液各10μl,分别点于同一硅胶ＧＦ<[254]> 薄层板上，以甲苯－四氢呋喃－冰醋酸(90:9:3)为展开剂。展开后，晾干，置紫外光灯(254nm) 下检视，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深；供试品溶液如显荧光斑点，其荧光强度与对照品溶液的主斑点比较，不得更强。） （二）根据原文设计检验方案：
1、 薄层板的制备：除另有规定外，将1份（3.5g）硅胶GF254和3份（9~12ml）羧甲基
纤维素钠水溶液（0.5%~0.7%）在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入玻板上赶快振动玻板使得均匀分布（厚度为0.2~0.3mm）取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置于有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
2、 供试品溶液的制备：取本品的细粉适量（取规格为0.5g的奈谱生片，平均片重×8
片的重量的奈谱生片粉加无水乙醇稀释至100ml ）（约相当于奈谱生4g）加无水乙醇，振摇，使奈谱生溶解并稀释成每1ml中含40mg的溶液，滤过，取滤液作为供试品溶液；
3、 对照品1溶液的制备：精密量取供试品溶液适量，加甲醇稀释成每1ml中含0.10mg
的溶液作为对照品溶液；（稀释方法：精密量取供试品溶液5ml置100ml容量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀。再精密量取这100ml容量瓶中供试品溶液5ml置另一个100ml容量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，即可。） 4、 点样；用微量刻度点样器取对照品和供试品溶液各10ul分别点于同一硅胶GF254薄层
板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径为2mm及点间距离约为1.5~2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 5、 展开：（展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的（以点样点不浸入为
度）展开剂，并在壁上贴二条与缸一样高宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡）以甲苯-四氢呋喃-冰醋酸（90：9：3）为展开剂，展开后，晾干。 6、 结果：取以上晾干后的玻板置紫外光灯下（254nm）检视，供试品溶液如显杂质斑点，
与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
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7、 结论：（不）符合规定 五、 注意事项：
1铺板时要注意避免气泡的产生、厚薄要均匀一致，并晾干活化后再使用。 2点样时，原点的直径以1-3mm较合适，并注意点样量以10ul为宜。 3展开时可先将薄层及展开槽进行预饱和，以便得到重现的色谱图。 六、 记录：
现象： 结论：
薄层图 ： 室温：25℃
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实验五、阿昔洛韦片的鉴别检验（薄层色谱法）
一、 实验目的：
学会并掌握铺板、点样、展开、观察结果等薄层色谱法的操作技能。 二、仪器药品：
阿昔洛韦片、氢氧化钠、三氯甲烷（氯仿）、甲醇、硅胶GF254、羧甲基纤维素钠、玻璃板、塑料或铝基片、紫外光灯下（254nm）、恒温干燥箱、干燥器、微量刻度点样器、双槽展开缸等
三、 实验原理：
此法，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。
四、 实验步骤： （一）、原文：
取本品的细粉适量（约相当于阿昔洛韦片25mg），加氢氧化钠液（0.1mol/L）-甲醇（1﹕4）10ml，振摇，使阿昔洛韦溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取阿昔洛韦对照品，用氢氧化钠液（0.1mol/L）-甲醇（1﹕4）制成每1中含2.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（按中国药典1990年年版二部附录30页）试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲醇-水（70﹕29﹕1）为展开剂，展开后，取出，晾干，置紫外灯（254nm）下检视，供试品溶液所显示的主斑点的位置应与对照品溶液的主斑点相同。 （二）、根据原文拟定操作步骤：
1、薄层板的制备：除另有规定外，将1份（3.5g）硅胶GF254和3份（9～12ml）羧甲基纤维素钠水溶液（0.5%～0.7%）在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入玻板上赶快振动玻板使得均匀分布（厚度为0.2～0.3mm）取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在恒温干燥箱中110℃烘30分钟，即置于有干燥剂的干燥器中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。、
2、供试品溶液的制备：取本品的细粉适量（约相当于阿昔洛韦片25mg），加氢氧化钠液（0.1mol/L）-甲醇（1﹕4）10ml，振摇，使阿昔洛韦溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液； 3、对照品溶液的制备：取阿昔洛韦对照品，用氢氧化钠液（0.1mol/L）-甲醇（1﹕4）制成每1ml中含2.5mg的溶液，作为对照品溶液。[取阿昔洛韦对照品0.25g加氢氧化钠液（0.1mol/L）-甲醇（1﹕4）溶液至100ml的刻度，摇匀，即得。]
4、点样；用微量刻度点样器取对照品和供试品溶液各10ul分别点于同一硅胶GF254薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径为2mm及点间距离约为1.5～2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 5、展开：（展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的（以点样点不浸入为度）展开剂，并在壁上贴二条与缸一样高宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡）以三氯甲烷（氯仿）-甲醇-水（70﹕29﹕1）为展开剂，展开后，晾干。
6、结果：取以上晾干后的玻板置紫外光灯下（254nm）检视，供试品溶液主斑点与对照溶液的主斑点位置上相同。
7、结论：符（不）合规定 （三）实验流程图：
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五、注意事项：
1铺板时要注意避免气泡的产生、厚薄要均匀一致，并晾干活化后再使用。2点样时，原点的直径以1-3mm较合适，并注意点样量以10ul为宜。 3展开时可先将薄层及展开槽进行预饱和，以便得到重现的色谱图。
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